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制作劃痕實驗需要注意事項
點擊次數(shù):698 更新時間:2023-12-04

      傷口愈合試驗,也通常稱為“劃痕試驗",是一種廣泛建立的研究體外集體細胞遷移的技術(shù)。細胞劃痕(Wound Healing)是一種操作簡單,經(jīng)濟實惠的研究細胞遷移/腫瘤侵襲的體外試驗方法。其實驗原理是,當細胞長到融合成單層狀態(tài)時,在融合的單層細胞上人為一個空白區(qū)域,稱為“劃痕"。劃痕邊緣的細胞會逐漸進入空白區(qū)域使“劃痕"愈合。

      條件好的實驗室可以使用活細胞成像來分析創(chuàng)傷愈合實驗中角質(zhì)形成細胞或者成纖維細胞的遷移活動。結(jié)合包含的軟件分析算法,有可能延遲量化間隙表面關(guān)閉和關(guān)閉推移時間的速度。使用延時顯微鏡獲取數(shù)據(jù)的優(yōu)點是,可以在恒溫箱內(nèi)確定和穩(wěn)定的條件下記錄傷口分析。

      通常,用于傷口愈合試驗的細胞類型旨在重建表皮的再生特征。永生化的細胞系和原代細胞經(jīng)常被用作這方面的模型。蕞常用的細胞類型是角質(zhì)形成細胞和成纖維細胞。

       條件好的實驗室可以使用活細胞成像來分析創(chuàng)傷愈合實驗中角質(zhì)形成細胞或者成纖維細胞的遷移活動。結(jié)合包含的軟件分析算法,有可能延遲量化間隙表面關(guān)閉和關(guān)閉推移時間的速度。使用延時顯微鏡獲取數(shù)據(jù)的優(yōu)點是,可以在恒溫箱內(nèi)確定和穩(wěn)定的條件下記錄傷口分析。

       通常,用于傷口愈合試驗的細胞類型旨在重建表皮的再生特征。永生化的細胞系和原代細胞經(jīng)常被用作這方面的模型。蕞常用的細胞類型是角質(zhì)形成細胞和成纖維細胞。

制作劃痕實驗需要注意:

1. 細胞的密度;劃痕實驗一般是幾種細胞的結(jié)合,但是每種細胞的生長速度會不一樣,所以需要按照細胞的生長特性調(diào)整培養(yǎng)時間,細胞鋪滿孔底時劃痕的效果會比較好,建議是100%的鋪滿。

2. 用槍頭畫線時盡量垂直,以6孔板為例 ,一個孔可以畫6條線。

3. 畫線之后一定要用PBS洗兩次,以去除劃下的細胞。

4. 注意培養(yǎng)方式一定要改成無血清或者低血清的培養(yǎng)基,因為:劃痕后用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞,意在說明在監(jiān)測的 24 小時內(nèi),劃痕的縮小是細胞 遷移作用的結(jié)果,所以要將細胞增殖造成細胞遷移的影響降到蕞低;但若細胞改成無血清培養(yǎng)后大面積漂浮,需要適量加入血清濃度不能高于2%。

5. 放入37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱,培養(yǎng)??砂?,10,12,15時間點取樣,拍照(具體時間依實驗需要而定)。

6. 統(tǒng)計方法:使用Image J軟件打開圖片后,抓取自己畫的線條,計算細胞間距離的平均值。


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